微藻培養基配制與滅菌方法及其步驟

国产v亚洲v天堂a什麽是微藻培養基?微藻培養基需要達到哪些要求?

国产v亚洲v天堂a????微藻培養基是供微藻生長、繁殖、代謝的混合養料。

????由於微藻具有不同的營養類型,對營養物質的要求也各不相同,加之研究的目的不同,所以培養基的種類很多,使用的原料也各有差異,但從營養角度分析,微藻培養基中壹般含有微藻所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。

????另外,培養基還應具有適宜的pH值、壹定的緩沖能力、壹定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達到特定要求的研究,需要進行培養基配制和滅菌

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微藻培養基該如何配制與滅菌?

1.配制溶液

??液體培養基:向容器內加入所需水量的壹部分,按照培養基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解最後補足所需水分,對蛋白腖、肉膏等物質,需加熱溶解,加熱過程所蒸發的水分,應在全部原料溶解後加水補足。

????固體培養基:配制時,先將上述已配好的液體培養基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續加熱至完全融化.並不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。

2.調節pH值

??用pH試紙(或pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進行調節,直到調節到配方要求的pH值為止。

3.過濾

??用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾.

??用紗布過濾時,最好折疊成六層;用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏鬥上過濾。

4.分裝

??已過濾的培養基應進行分裝.

??斜面培養基:須將培養基分裝於試管中.壹般用每只15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度).

??平板培養基/液體、半固體培養基:則須將培養基分裝於錐形瓶內。分裝時,壹手捏松彈簧夾,使培養基流出,另壹只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養基。分裝時,註意不要使培養基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌汙染。裝入試管的培養基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定.

??深層培養基:用20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每只錐形瓶裝入的培養基,壹般以其容積的壹半為宜。

5.加棉塞

??分裝完畢後,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免汙染.棉塞應采用普通新鮮、幹燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。

??制作棉塞時,要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小壹塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與姆指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞.

??棉塞作成後,應迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應緊貼內壁不留縫隙,以防空氣中微藻沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好後,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內,上端露出少許棉花便於拔取。

??塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆劄,準備滅菌。

?6.制作斜面培養基和平板培養基

?培養滅菌後,如制作斜面培養基和平板培養基,須趁培養基未凝固時進行。

??制作斜面培養基:在實驗臺上放1支長0.5~1米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內培養基自然傾斜,凝固後即成斜面培養基。

??制作平板培養基:將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上,點燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養皿蓋,右手迅速將培養基倒入培養皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度.鋪放培養基後放置15分鐘左右,待培養基凝固後,再5個培養皿壹疊,倒置,平放恒溫箱,24小時後檢查,如培養基末出現異常現象,即可用來培養微藻。

 

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