交流回顧:微藻工廠化培養經驗及配方分享

微藻工廠化培養經驗及配方分享

国产v亚洲v天堂a 微藻工廠化培養經驗及配方分享

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  大家好,很高興今天能跟大家交流壹下微藻的規模培育。規模培育在水產養殖方面現在主要運用於大棚生物餌料方面(壹定地點建立車間、濃縮之後近距離管道運輸到養殖區域)、提取色素添加在飼料中,至於土塘潑灑,如何控制量、增氧和開口餌料這方面正在摸索,需要大家壹起總結出經驗。今天我跟大家主要跟大家分享壹下藻種的工廠化規模化培育。
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  群裏面應該很多人都培育過藻,大家都知道藻種的培育分為壹級、二級、三級培養,今天我是簡單從壹級、二級、三級培養過程可能中遇到的問題、日常管理、接種、藻種營養配方這些方面做壹下簡單的交流。
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  因各地環境氣候、溫度、光照、水質條件不同。不同季節、藻種性質不同,單位水體養殖品種的需求量也不同。所以培養條件、營養鹽配方等各有不同。今天我主要是以金藻為例,引申出其他藻種的營養配方,讓大家學習壹下其中的相似點。
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  國內大部分水產育苗企業,在育苗生產中都是自備微藻養殖設施,自行生產各類餌料用微藻。但是壹般育苗場都普遍缺乏相應的專業技術力量,只能利用各自的藻池和天然水體粗放培養,在餌料微藻種質、生產技術和應用方法上都各自為正,導致微藻種質混亂、供應不穩定、營養成分不平衡、餌料效價低、缺乏多品種集約化生產應用技術;同時,受限於微藻高密度養殖、采收技術和濃縮液保藏技術的限制,國內幾乎沒有統壹的、專業化的餌料微藻質量標準和集中供應點。所以工廠化育苗需要及時的補充藻種,開口餌料非常重要。
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  首先從工藝流程上來說
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  壹級培養:主要用於保種,主要用的儀器是錐形瓶,其能夠完全消毒,所以應用在保種上面特別多。
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  二級培養:主要是用塑料白桶(聚丙烯材料),生產上也用20L的飲水桶,但是瓶口小,操作不方便,消毒也不徹底;而用氧氣袋又易破裂。在南方經常可以見到用玻璃制作的大型魚缸和氧氣袋。
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  三級培養:主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室內水泥池,采光良好,白色透明玻璃鋼瓦或塑料薄膜於車間頂部用於培育藻種。
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  接下來我主要簡單的講壹下容器和工具的洗滌、消毒。
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  培藻過程中所有的容器和工具,比如錐形瓶、礦泉水桶、攪拌棒等必須經過去汙漬、肥皂等刷洗,之後再用消毒後的蒸餾水沖洗3-4遍。
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  消毒的方法壹般有加熱消毒法、化學試劑消毒法、紫外線消毒法。
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  壹般小型儀器用加熱消毒法,比如錐形瓶,方法是在錐形瓶瓶口放壹培養皿,瓶中加水,煮沸,煮沸完之後,用牛皮紙或紗布包住,備用,這種方法能殺死營養體的部分芽孢。
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  大型儀器、工具、培養池用化學藥品消毒(漂白粉、酒精、高錳酸鉀、鉻酸洗液等),漂白粉的有效氯含量壹般是30-35%,漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍,消毒時按1/10000-3/10000的含量配成水溶液,浸泡容器、工具半小時,再用消毒水沖洗3-4次(消毒水既是煮沸、沈澱、過濾其中的水)。
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  水泥池的消毒可配成高濃度的漿糊狀漂白溶液,淋灑池壁,半小時後用消毒水沖洗幹凈。也可以用較低含量的漂白粉進行全池浸泡後,用消毒水沖洗,停放12小時後才可使用。
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  酒精消毒壹般用於人為操作,如在活化藻種、搖瓶或者攪拌的時候,塗抹手,消毒小的儀器上使用。酒精壹般是配置成70-75%左右,殺菌效果是最顯著的,使生物蛋白脫水變性凝固,故有殺菌效果。
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  海水的消毒,壹般海水的消毒有過濾和加入化學消毒劑法。因為海水消毒主要用於三級培養,三級大規模培養時候主要用於殺滅有害生物,處理水必須無毒,對培養藻類的生長繁殖影響不大。水消毒必須簡單、經濟、易行,不然大規模運水特別多的時候培藻成本會加大。
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  補充:消毒海水時可根據培養的目的和方式選用以下方法之壹。
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  1、加熱消毒法:經沈澱、過濾的海水,壹般加溫至90℃左右維持5分鐘或達到沸騰即可。由於海水中的壹些對藻類生長有促進作用的有機物在高溫時易遭破壞,所以加溫時間不宜太長。
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  2、過濾除菌法:把經沈澱的海水先經砂濾,把大型生物和非生物雜質去除,再用陶瓷過濾罐過濾,除去微小生物。
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  3、次氯酸鈉消毒法:按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸鈉溶液,充氣10分鐘後停氣,經6~7小時消毒後,按每立方米水體25克的量加入硫代硫酸鈉,強充氣4~6小時,用硫酸-碘化鉀-澱粉溶液測試,若無余氯即可使用。
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  4、紫外線消毒:有成型的紫外線消毒器可供選用。但此法不易殺滅較大的浮遊動物。最好和過濾法結合使用。
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  加熱消毒我們就不解釋了。
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  主要是過濾除菌消毒,沈澱後的海水經過紗慮池紗慮大型的生物及非生物雜質出去,再經陶瓷過濾罐過濾,除去微小生物,也可兩次紗慮,兩次紗慮也可以起到比較好的效果。
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  漂白粉和漂白液消毒的時候,向水中加入漂白粉和漂白液,用硫代硫酸鈉中和余氯,中和余氯的過程以及操作流程的具體步驟如下:
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  氯含量測定
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  方法壹
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  硫代硫酸鈉滴定法
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  需要的物品:
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  1%碘化鉀溶液 (1 g溶於100ml水中)
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  1.58%硫代硫酸鈉溶液 (1.58g溶於100ml水中 )
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  HCI 37%
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  樣品溶於壹定數量的水中的溶液(即稀釋壹定倍數)
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  程序
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  在滴定瓶中加50ml碘化鉀溶液,0.25ml HCI 和1ml樣品溶液,這時候瓶中溶液應該變為褐色用硫代硫酸鈉滴定,直到瓶中溶液變為澄清(沒有顏色)。
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  每ml硫代硫酸鈉可以中和3.55ppt的氯樣品溶液的氯濃度 = 硫代硫酸鈉的毫升數×3.55 ×100/1000(%) 樣品的氯含量=樣品溶液的氯濃度×樣品稀釋倍數
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  方法二
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  1. 試劑
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  (1)KI溶液:10%。
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  (2)澱粉溶液:0.5%。 稱取0.5克可溶性澱粉於小燒杯中,用少量水攪勻後加入 100ml的沸水中,加入後不斷攪拌,並煮沸至溶液透明為止。加熱時間不易過長且應迅速冷卻,以免降低澱粉指示劑的靈敏性能。如需久存,可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐劑。
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  (3)H2SO4溶液:2 mol/L。
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  (4)K2Cr2O7標準溶液:0.1000 mol/L。將K2Cr2O7在150-180℃烘幹2小時,放入幹燥器中冷卻至室溫。準確稱取1.2258克於100ml燒杯中,加蒸餾水溶解後轉入250ml容量瓶中,用水稀釋至刻度充分搖勻。
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  (5)Na2S2O3溶液:0.1 mol/L。將12.5克Na2S2O3 ·5H2O溶解在500毫升新煮沸冷卻後的水中,加入0.1克碳酸鈉,儲於棕色瓶中並搖勻,保存於暗處壹周後標定使用。(低濃度的溶液需稀釋)
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  (6)丙二酸:20%溶液。
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  2. 實驗步驟
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  (1) 硫代硫酸鈉溶液的標定
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  用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重鉻酸鉀標準溶液三份,分別置於250毫升碘量瓶中,加入5毫升6N鹽酸、5毫升20%KI,搖勻後在暗處放置約5min,待反應完全,用100毫升水稀釋。用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液由棕色到綠黃色,加入2毫升0.5%澱粉指示劑,繼續滴定至溶液由藍色至亮綠色即為終點。根據消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數計算其濃度。(低濃度的溶液標定類似)
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  (2) 有效氯含量的測定
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  取10毫升待測消毒溶液,置於250毫升碘量瓶中,加入2 mol/L 硫酸 10毫升,10%碘化鉀溶液10毫升,此時溶液出現棕色。蓋上蓋並振搖混勻後加蒸餾水數滴於碘量瓶蓋緣,在暗處放置約5min。打開蓋,讓蓋緣蒸餾水流入瓶內。用硫代硫酸鈉溶液(裝於25毫升棕色滴定管中)滴定遊離碘,邊滴邊搖勻,待溶液呈淺棕黃色時,加入10滴0.5%澱粉指示劑,溶液立即變藍色,繼續滴定至溶液由藍色至無色即為終點。記錄消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數(V,ml)。 重復測3次,取3次平均值進行以下計算。 因1 mol/L硫代硫酸鈉標準溶液
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  營養鹽
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  接下來說壹下營養鹽的加法。以金藻為例,金藻的生長繁殖過程中必須每個營養元素都有壹個最低量,如果低於這個最低量,生長繁殖則會受到抑制,如果某種營養的含量過高也會對藻類產生毒害作用,甚至死亡,因為含量過高會破壞滲透壓系統,讓藻脫水死亡。
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  今天我跟大家說壹下金藻的營養鹽,壹般主要的營養鹽配方是F/2,營養鹽有大量元素、微量元素以及維生素,大量元素壹般都是硝酸鈉(NaNO3)、磷酸二氫鈉( NaH2PO4),微量元素有鋅(Zn)、錳(Mn)、鉬(Mo)、鈷(Co)、銅(Cu)、鐵(Fe),維生素有維生素B1(VB1):主要是輔助糖類代謝,對能量起到積極的作用、維生素B12(VB12):有利於鐵的利用,促進代謝等發育成熟、維生素B6(VB6):活化多種酶,有助於VB12的吸收等、生物素(VBH):脂肪和蛋白正常代謝不可或缺的物質,是壹種維持生長、繁殖的營養素。
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  培藻過程中如果是人工繁殖時,在光照、營養鹽、PH適合的情況它會非常大規模的繁殖。此時,水體中的二氧化碳會成為藻類繁殖的限制因子。現在金藻和其它藻在人工繁殖的時候,碳源的補充是非常重要的,因為其它營養鹽可以通過正交分解得出最優的含量,而在藻體繁殖過程中光合作用需要大量的二氧化碳,從而導致碳源的需求量增大,這時根據情況人為補充碳源的話會起到非常好的繁殖效果,可通過氣石、攪拌等方式補充二氧化碳。
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  培藻過程中如果是人工繁殖時,在光照、營養鹽、PH適合的情況它會非常大規模的繁殖。此時,水體中的二氧化碳會成為藻類繁殖的限制因子。現在金藻和其它藻在人工繁殖的時候,碳源的補充是非常重要的,因為其它營養鹽可以通過正交分解得出最優的含量,而在藻體繁殖過程中光合作用需要大量的二氧化碳,從而導致碳源的需求量增大,這時根據情況人為補充碳源的話會起到非常好的繁殖效果,可通過氣石、攪拌等方式補充二氧化碳。
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  培養金藻的時候,壹般壹、二級用康維方,康維方壹般基於F/2配方基礎上的壹個配方,而三級培養的時候用金藻培養液。
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  金藻培養液:硝酸鈉溶液:磷酸二氫鉀溶液:檸檬酸鐵氨=100:10:1,1000ml滅菌海水。
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  在三級培養的時候,營養鹽的添加都是1:1000的添加,就是1毫升的營養鹽添加到1L的水體中。在生產時可以為了生產等便利,可以放大配方比例,在大規模的培養中1:10000的添加也是可以的。實驗結果當然是1:1000最好,但是實驗和實際生產中肯定有壹定的誤差,在實際生產中1:10000也可以正常的培育出高密度的金藻。當然在大規模的培養中1:10000的添加,起到的效果稍微差壹點,但也不會差到哪裏去。
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  接種
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  接下來就是接種,接種其實也是壹個很簡單的操作,接下來我簡單說明下。
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  金藻在二級培養(高密度擴大培養的時候),能達到700——800萬個cell/ML,扁藻能達到100——150萬個cell/ML,小球藻也能達到1000萬個cell/ML。
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  接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養液中,進行豐富培養。
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  接種的過程雖然簡單,但要註意藻種的質量、藻種的密度、接入藻液的數量以及接種的時間等問題。
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  藻種的質量我們可以根據藻細胞運動、附壁、沈澱、鏡檢顏色,觀察它的質量好壞。金藻是金褐色,矽藻是呈黃褐色,綠藻是鮮綠色,有運動能力會上浮,沒有運動能力均勻漂浮在水中。
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  附壁和沈澱:好的藻種壹般沒有明顯的附壁,如果藻種受到環境因子等各方面的不適宜條件的時候,會大量的聚集沈澱。
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  鏡檢的時候壹般都是觀察顏色和運動,有無雜藻,有無大的原生動物和蟲子,水體中的藻種是否過關。
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  接藻的時候,金藻培育從二級向三級接的時候,金藻藻細胞達到250萬/毫升的時候就可以接種了。
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  壹級培養或小型培養可以是1:2或者1:3的接種,二級培養或生產培養可以是1:10、1:20、1:40的接種也可以正常生長。剛說的這些,1:20不清楚,我舉壹些簡單的例子,假設5000Ml的錐形瓶,培養5000ML的藻液,可以接種1個 20L的礦泉水桶,3個20L的礦泉水桶可以接種1m3的保種池,1m3米的保種池可以接種2個5m3的生產池。
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  接種時間壹般選擇在早上的8:00——10:00,這時候選擇接種是因為藻體的活性隨著光照、環境溫度的上升,活性是最好的,接種的時候它能夠快速的進入到指數生長期。
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  培養工藝,金藻培養有壹次性施肥、混合營養鹽的施肥和碳酸氫鈉分批次的施肥。金藻在國內現在應該是開放式半連續培養。
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  日常管理
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  日常管理是非常重要的壹塊,跟消毒壹樣。比如妳培養了30m3的水池,如果妳培養時從顏色等感覺還行,突然之間有可能全部死亡,可能是妳日常管理不規範、不細致,引起雜菌繁殖和無法探知的原因導致培養的藻體全部死亡。
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  首先日常管理的第壹步,攪拌和充氣,就像壹級培養,壹級培養就是保種,我會在保種間每天3次(早、中、晚)搖晃錐形瓶,使其均勻分布,不會粘黏器壁。二級培養需要增加氣石來補充二氧化碳的量,或者搖晃容器。三級培養需要攪拌棒和氣石給金藻補充二氧化碳搖晃、攪拌和充氣壹般都是補充二氧化碳,防治藻之間產生菌膜,還有均勻受光、池底、礦泉水桶裏面的藻類上浮獲得光照。
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  攪拌充氣最好每天定時進行三次,每次大約在半分鐘左右就可以了。
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  調節光照這塊,壹般的藻類不能忍受強烈的直射光照,車間頂部壹般都是用透明玻璃鋼瓦采光。光弱的時候需要增加人工的光源,如日光燈、碘鎢燈。
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  根據藻種所需的最適光照強度範圍,1w的燈大概是12.6Lx左右的能量,像金藻需要的最適光照強度(球等鞭金藻7000-9000,湛江等邊金藻5000-11000)可以根據燈光計算出來所需多少瓦燈,直接補充多少的光照就可以正常生長。
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  高溫不利於生長,夏季室內培養的時候壹般需要通風降溫,通風降溫在北方壹般夏季用風扇,北方冬天氣溫低,壹般室外也不能培養,室內壹般采取水暖、氣暖等措施來供暖。
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  有條件的車間,會在天窗加蓋紗窗布,防止蚊蟲進入,在藻體的水體中產卵。如果發現其產卵或昆蟲的屍體,需要及時撈掉。刮大風的時候要盡量避免泥土、雜物等吹入培養池、因為泥土裏面含有大量的細菌等。
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  生長情況
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  最後壹般都是生長情況的觀察。
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  生長情況的觀察首先是觀察顏色。金藻生長良好時呈金褐色。接種後,隨著藻類的細胞濃度逐漸增加,正常情況顏色由淺變深。若顏色由深變淺則可能是由於環境因子不適宜引起的;若出現其他顏色,如藍色、黃色、乳白色等,說明被其它汙染了。
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  藻體顏色保持原色的時候說明藻體沒有死亡,可能還在休眠,藻體是有自我保護機制得,有可能是環境因子導致藻體自我保護了,如果環境較好的時候,活化壹下,藻種還能正常生長。但如果藻體變成灰白色說明藻體已經開始死亡、腐敗。
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  接下來從藻種的運動和沈澱來看,金藻在顯微鏡下觀察時有鞭毛,但運動緩慢,壹般不會迅速上浮,而是形成趨光帶,細胞群成線狀上浮。當環境不適時,藻類會下沈形成沈澱,當環境變好時則上浮。如果在環境條件正常時藻液大量沈底,出現沈澱,而且經過攪拌後又很快下沈,則是不正常現象。沈澱藻體的顏色如果保持原色,說明還沒有死亡,有可能恢復正常生長。如果藻體變成灰白色,則藻類已死亡。這就是我剛才說的藻體顏色判斷時候可能出現的情況。造成藻類沈澱的原因是多方面的,但主要的原因是環境不良或營養不足使藻類的生長受到抑制。
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  還有壹個附壁現象,金藻我在培養的時候很少出現附壁現象,我在培養的時候扁藻、綠藻很容易出現附壁,聚集成團之後沈底的情況。如果聚集沈澱有可能是菌膜,即生物汙染物(有細菌大量繁殖的時候,藻細胞可由菌膜互相粘黏而形成團塊狀)。
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  最後壹步就是藻體培育成功之後的采收,采收現在壹般都是用水泵直接抽取藻液,然後進行超濾過濾,最後收集濃縮藻液。現在的濃縮技術有抽濾、聚沈、上浮等。
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  單胞藻營養配方
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  最後我跟大家分享壹下幾個單胞藻的壹些營養鹽配方。配方來自於中國科學院海洋研究所海洋生物種質庫真實性有待考證。
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  壹、常規藻類配方
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  1、壹般用培養液配方
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  NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.03克
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  CO(NH2)2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.03克
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  KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.005克
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  FeC6H5O7(1%溶液) ? ? ? ? ? ? ? 0.2毫升
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  維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?200微克
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  維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 200毫微克
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  人尿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1.5毫升
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升培養
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  綠藻、金藻、矽藻使用,培養矽藻時添加0.02克/升矽酸鈉。
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  2、綠藻培養液配方
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  2.1 ?海洋3號扁藻培養液
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  NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.1克
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  KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.01克
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  Fe(SO4)3 ?(1%溶液) ? ? ? ? ? ? ? 10滴
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  2Na3C6H5O7 ?11H2O ? ? ? ? ? ? ? ?0.02克
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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  2.2 ?亞心形扁藻培養液
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  NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.05克
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  KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.005克
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  FeC6H5O7 ?(1%溶液) ? ? ? ? ? ? ?0.2毫升
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  維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?200微克
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  維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 200毫微克
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  人尿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2毫升
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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  3、矽藻培養液配方
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  3.1、湛江水產學院矽藻培養液
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  NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.08克
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  KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.008克
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  FeC6H5O7 ?(1%溶液) ? ? ? ? ? ? ?0.2毫升
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  Na2SiO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.02克
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  維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 200微克
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  維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?200毫微克
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  人尿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1.5毫升
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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  培養三角褐指藻、小新月菱形藻、鈣質角毛藻、牟氏角毛藻。
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  3.2、中肋骨條藻培養液
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  KNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.4克
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  Na2HPO4 ?2H2O ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.04克
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  K2SiO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.02克
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  Fe(SO4)3 ?7H2O ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.014克
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  土壤提取液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?15毫升
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  “920”植物生長激素 ? ? ? ? ? 4~5國際單位
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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  3.3 ?牟氏角毛藻配方
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  NH4NO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?5~20毫克
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  KH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5~1毫克
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  FeC6H5O7 ?3H20 ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5~2毫克
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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  4、金藻培養液配方
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  4.1 ?“f /2”培養液
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  NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 74.8毫克
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  NaH2PO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 4.4毫克
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  Na2SiO3 ?9H2O ? ? ? ? ? ? ? ? ? 8.4~16.7毫克
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  f /2微量元素溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ?1毫升
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  f /2維生素溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1毫升
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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  4.2 ?等鞭金藻OA-3011培養液(陳椒芬等)
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  NaNO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.06克
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  K2HPO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.004克
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  FeC6H5O7 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5毫克
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  Na2SiO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.005克
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  維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 100~500微克
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  維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5~1.5毫克
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  NaHCO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1克
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  海水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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  二、微量元素溶液配方
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  1、A5-B6微量元素溶液配方A5:
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  H3BO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2.86克
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  MnCl2.4H2O ? ? ? ? ? ? ? ?1.81克
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  ZnSO4.7H2O ? ? ? ? ? ? ? ?0.22克
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  CuSO4.5H2O ? ? ? ? ? ? ? ?0.08克
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  Na2MoO4 ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.021克純
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  水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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  H2SO4 (濃) ? ? ? ? ? ? ? ? 1滴
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  B6NH4VO3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 229.6毫克
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  Cr2(SO4)4.24H2O ? ? ? ? ? ?960.2毫克
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  NiSiO4.6H2O ? ? ? ? ? ? ? 447.8毫克
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  Co(NO3)2.6H2O ? ? ? ? ? ? 493.8毫克
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  Ti溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 20毫升
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  0.2摩爾/升 H2SO4 ? ? ? ? ? 1000毫升
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  Ti溶液配法:把736.6克草酸鈦溶解於少量純水中,加入氫氧化銨使成堿性,發生沈澱。用離心機將沈澱集中,用0.2摩爾的硫酸20毫升溶解。用量:每1000毫升培養液中加入A5、B6溶液各1毫升。
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  2、“f /2”微量元素溶液
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  ZnSO4.4H2O ? ? ? ? ? ? ? ?23毫克
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  MnCl2.4H2O ? ? ? ? ? ? ? 178毫克
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  CuSO4.5H2O ? ? ? ? ? ? ? ?10毫克
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  FeC6H5O7.5H2O ? ? ? ? ? ? ? 3.9克
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  Na2MoO42H2O ? ? ? ? ? ? ?7.3毫克
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  CoCl2.6H2O ? ? ? ? ? ? ? ? 12毫克
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  Na2EDTA ? ? ? ? ? ? ? ? ? 4.35克
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  純水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1000毫升
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  每1000毫升培養液加1毫升。
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  三、維生素溶液配方
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  1、維生素溶液S3
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  硫胺素鹽酸鹽 ? ? ? ? ? ? ? ?0.05克
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  尼古丁酸(煙酸) ? ? ? ? ? ?0.01克
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  泛酸鈣 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.01克
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  對氨安息香酸 ? ? ? ? ? ? ? ? 1.0克
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  維生素H ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.1
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  克肌醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 0.5
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  克葉酸 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.2
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  微克胸(腺)間氮苯 ? ? ? ? ? ? ? 0.3克
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  純水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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  每1000毫升培養液中加入1毫升。
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  2、“f /2”微生素溶液
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  維生素B12 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5毫克
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  維生素B1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 100毫克
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  維生素H ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?0.5毫克
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  純水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1000毫升
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  1000毫升培養液中加入1毫升。
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  現在很多情況下我們都是藻種培養規模培育之後,很多人希望運用到土塘培養方面,土塘水質調控、開口餌料等方面(單位幼苗生物餌料投餵量),但是給土塘如何潑灑、如何控制那個量,起到最好的增氧效果方面,我在天津做的時候我的壹個老師建議我別往這方面做,因為各地環境因子等不同,在室外培養受到天氣、氣候等的影響,不利於培養。
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  所以我只是以金藻為例,把培育藻的簡單的操作和需要註意的壹些點跟大家交流壹下,希望有能力、有想法的、自己想做的可以往土塘方面發展,因為個人能力有限,各地情況不同,我也總結不了這麽多東西。
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  互動環節
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  1、小球藻在室外,簡易培養是否可行?培養好後是否可以直接給貝類投餵?小球藻的配方?小球藻在培養過程當中會不會把青苔種也培養起來了?
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  室外培養是可行的。現在也有人在做,我也想往這方面做,室外培養壹般是開放池培養,設備簡單壹點,技術含量也低,投資也少,但是產量會低壹些,容易受到自然環境的影響。
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  苗種易消化吸收,可以通過水的過濾,吸收水體中的小球藻。小球藻的配方壹般都是SE培養基,PR培養基、Bg-11培養基(Bg-11培養基培養藍藻用的),這幾個培養跟F/2培養基十分相似。
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  現在我做的壹般都是工廠化室內水泥池的大規模培養,沒有遇到過把青苔的培養起來的情況。
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  2、妳好,老師,我想咨詢用濃縮藻液小球藻大規模擴培小球藻方面的知識,如何防蟲殺蟲?抑制雜藻的生長,還有就是關於小球藻液保存方面的問題,除了低溫保存,可不可以添加某些試劑讓其不下沈不大量死亡呢?
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  濃縮方面的介紹,擴培小球藻操作類似於金藻,因為全天是工廠化大規模擴培,很少出現雜藻。在大規模擴培的時候,從二級向三級擴培,小球藻已經成為優勢種群,小球藻會產生抗生物質,會抑制其它雜藻、菌的繁殖,因為我是做擴培方面的,只要我殺菌消毒比較徹底的情況下,就很少有雜藻、蟲等的出現。
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  如果是保存,循環移液保存法,方法很簡單,而且保存的藻種活力強,純度高。但保存的量跟儀器的數量有關。
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  具體的操作:把藻液在規定的時間內(差不多10天或者7天),把藻種過濾到消毒海水之後,再保存,也就是循環移液的保存,保存的時間比較長,壹般學校實驗室的藻種都是循環移液保存,但僅是保存藻種,而大規模的保存現在用的是買藻種保存的方法(濃縮低溫保存法)。
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  至於添加某個試劑讓其不下沈不大量死亡,我沒有做過,因為我是直接在育苗廠或者苗場附近,建立車間,直接規模培藻之後,直接運輸,濃縮方面是非常方便的,在建廠設計方面已經設計好了的。
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  3、小球藻培養方式與如何控制藻相?
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  小球藻的培養方式,類似金藻的培養方式(剛才以金藻為例,就是這個原因)。
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  至於藻相的控制,如果是土塘則不希望壹次肥水,壹次肥水很容易肥水過量,因為藻種肥育起來特別迅速之後很容易倒藻,所以希望分批次的添加,而少量多次的添加,控制藻相可以給蝦、魚苗補充開口餌料,為水體補充氧,又能降解氨氮、亞鹽等,這是壹個養殖經驗的積累。
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  工廠化方面的育苗根據養殖密度等綜合條件判斷添加的數量。工廠化培育的時候,因為可以直接算出1L水體中有多少藻細胞,添加多少藻細胞不會導致水質等各方面出現問題,這方面也是壹個經驗的把控。
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  4、培水穩水水體通常該補充哪些微量元素,比例是多少,時間間隔等有沒有壹個相對可操作的模式?
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  通常補充的微量元素,就跟我剛才發的配方壹樣,壹般都是F/2微量元素,F/2微量元素壹般都是鋅、錳、銅、鐵、鉬、鈷。對於具體比例,不同的藻的含量不壹樣,如果綜合了好幾種藻的話,所需最佳量取壹個最佳值,如果是單個藻種培養可以直接有微量元素的比例。
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  現在就像我說的那種,培養工藝上,培養的時候直接壹次性添加,把營養鹽起始就添加完畢;或者就是混合營養鹽添加,前批次添加像大量元素磷酸二氫鉀,硝酸鈉,之後再添加(如果培養矽藻的話)矽酸鈉或者碳酸氫鈉等,也可以用碳酸氫銨代替碳酸氫鈉加入。
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  所謂時間間隔,微量元素壹般都是壹次性添加,計算單位水體需要添加多少,目前都是這麽添加的。
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  5、綠藻,矽藻,隱藻,甲藻的生命周期是多少天。藻毒素是怎麽產生的。
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  藻細胞具體的生命周期我不知道,如果生存環境適宜了,能夠延長指數生長期十幾天,如果把培養藻的模式變成連續培養,壹邊補充水體的營養鹽和添加消毒過的海水,壹邊取出藻液,可以連續生長,連續生長的時候,藻細胞會分裂生殖,所以我也不知道它具體是多久。
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  藻毒素就是藻體死亡的時候,藻細胞若不能及時的被分解,釋放的物質應該就是藻毒素。
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  6、土塘中及水泥池中矽藻的培育簡便配方。
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  如果是簡單的矽藻水池培育的話壹般,硝酸銨/磷酸二氫鉀/矽酸鈉=10/1/2於1000ML消毒海水中,這是個比例。期間可以添加維生素VB1:100mg ?VB12:1mg ?VH生物素:1mg。
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  7、培藻過程中如何有效控制黃綠菌以及原生動物?
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  有微生物制劑可以控制黃綠菌數量,因為我對菌這塊不是很了解,可以請教其他高手,我在試驗、生產中消毒壹般很少遇到。
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  8、矽藻(海鏈藻、角毛藻)的最高耐受溫度是多少?
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  角毛藻最高耐受溫度應該是30度,海鏈藻我不清楚。
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  9、對藻類進行離心濃縮會破壞其組織和營養嗎?
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  對藻類進行離心濃縮會減少其營養含量,像脂肪酸、蛋白質,假設含50%,會減少到40%,但是對組織的破壞壹般不會,現在離心濃縮,在國內運用最廣泛,其優越性不言而語,破壞的話就不會在國內廣泛應用的。
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  10、藻類濃縮部分的相關咨詢
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  ?1、微藻濃縮抽濾是如何實現的?
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  現在有超濾技術濃縮,過濾工具“板框式超濾器”,壓力泵,不銹鋼容器(20L),不銹鋼管路,冷卻系統。
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  超濾是壹項新型的膜分離技術,它以膜兩側的壓力差為推動力,在被處理料液流經表面具有微小孔徑的不對稱結構超濾膜時,實現不同分子量物質的分離等物理分離過程。
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  還有壹個是離心,國內應用最廣泛的。
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  氣浮和沈降:用明礬、氯化鐵對藻細胞起絮集、凝集、沈降的那種,把藻液分離之後收集
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  抽濾濃縮怎麽做?找制作的廠家,直接看說明書制作就行。
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  2、抽濾以後是什麽樣子,泥?膏?液體?
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  用機器抽濾完之後有壹層膜,像膏也像軟泥。
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  3、抽濾以後怎麽保存,可以保持多久活性
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  藻細胞保存的方式速凍和緩慢的漸凍有關,這兩種方式會對藻細胞的營養物質造成壹些損失,壹個能夠把藻細胞的營養物質保存壹95%壹個是80%多(假設量),所以這個看要保存多久和各方面綜合選擇妳要保存的方式,個人用途不同,有些人用藻是做餌料,有些是長途運輸做藻種,就看具體的用途來保存。濃縮保存3個月後進行再培養試驗,其生長曲線與標準再生長曲線相似,但曲線中延緩期稍長,可能由於濃縮液中營養鹽濃度相對較低的緣故。
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  4、濃縮藻 金藻 矽藻 扁藻都有嗎
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  金藻現在普遍都是細胞低溫保存技術,是可以濃縮的。扁藻也有濃縮的,像超濾濃縮但是矽藻我沒有用過濃縮,所以不是很清楚,按照其他藻種濃縮,理論可以。
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  11、海水藻類如何控制細菌感染和細胞密度的問題
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  我所知道的,我做的時候是做到無菌操作,當然也要看藻種,有些藻種是需要細菌協同的,需要菌來刺激它,才能相互生活得更好,大部分藻種有菌之後會產生拮抗抑制,協同的有個骨條藻,蟶的在開口餌料裏面就是骨條藻。
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  當然細菌控制的時候我的操作壹般都是,我在操作實驗和生產實踐的時候,首先對口罩、手套經過70%的酒精消毒,還有就是各方面的藥品都有消毒,盡量做到無菌操作。
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  控制細胞密度,這個密度如果是土塘、工廠化育苗的話,育苗池的密度可以通過進水、排水的方法控制。控制密度的方法簡單就那幾種。我做的是規模化爆發的增長,所以很少會想到控制生長,只能想到進水排水這種了。
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  細菌方面我盡量做到無菌操作,我對細菌這方面了解比較少,我盡量操作規範使細菌少地點,這樣提高成功率。
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  12,用次氯酸鈉消毒海水怎樣中和余氯?若果我1噸的水消毒後中和用的硫代硫酸鈉剛好是20克,那麽中和前的有郊氯是多少?若過量的硫代硫酸鈉對藻類影響大嗎?過量到什麽程度才會造成大有影響?
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  這個比較專業性,如果是硫代硫酸鈉剛好是20克應該是中和前有效氯16克壹立方水體中,過量肯定會造成影響。我在上面已經發壹個硫代硫酸鈉的余氯測試的操作過程,大家可以看看。我很少碰到過量的情況。影響肯定有。
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  13、海洋微藻養殖單獨作為獨立產業如何發展?例如,小球藻可以作為保健品。國內目前的海洋微藻產業發展狀況?
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  這個問得有點大了,這個方面需要大家共同探討,現在已經作為獨立的產業發展了,在印度、英國、日本、新加坡和臺灣等把藻作為保健食品,食品添加劑、色素和應用醫療方面、水產餌料和處理汙水方面也有,我在大學的時候有學過石油泄漏的時候用培養藻種分解石油,防治汙染水體,改善水產養殖水體的環境,當然還有壹個重要的就是培養燃料,藻類可以代替燃料,是可以發展的,國家重點基礎研究發展計劃(973計劃)好像都有提及這方面。現在這方面正在發展,還不是很規範。
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  14、能不能定向培養小球藻來用於養殖,怎樣保持,日常怎樣管理,密度不用高,水體透明度40公分,怎樣保持30天。
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  室外養殖定向培藻是絕對可以的,怎麽保持日程管理和密度不高,因為小球藻的分裂速度算最快的了,活性非常強,很難管控,造成在水產養殖中很少有大規模的繁殖,因為繁殖多了肯定會造成倒藻,如果想要控制好要小範圍試驗,分批添加小球藻,營養鹽等,目前我的水平保證不了穩定30天。
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  海南有說卵囊藻在水中穩定生存20天左右。卵囊藻往這方面正在運用,也有產品在市面流通。為什麽不用小球藻,就是因為現在小球藻根本控制不來,妳想想養壹造蝦3個月,如果連續2-3次穩定30天,結果非常可觀了。
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  小球藻定向培藻,我想往土塘這塊發展,所以我在天津這塊在弄,今天講這個就是希望有這個基礎配方,想自己嘗試的,可以自己來總結經驗。不用壹次性定向培藻過多,而是多次分批次的添加,掌握壹些經驗再相互學習交流。
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  15、能否提供壹個淡水三級培育小球藻的配方
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  小球藻,Bg-11培養基,我在學校的時候用過,它主要用於培養藍藻,但它可以是淡水培養應用的,也可以海水培養小球藻,這些妳可以嘗試壹下,
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  16、1L水體應有多少的藻細胞為合適?是指藻細胞的生物量嗎?您改良的配方給大家分享壹下好麽?
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  1L水體應有多少的藻細胞為合適?妳養的品種(魚蝦、扇貝,品種)不壹樣,單位水體需要的藻類細胞肯定不壹樣,各地環境差異,所以各地是不壹樣的。改良配方我剛才給大家的配方是可以培養金藻這類的。

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